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栏目更新 | 认识实验室检测方法原理及操作核酸部分


-本期内容节选如下-


了解了实验室的功能定位以及实验室检测/监测的应用价值与应用领域,本期我们将主要对实验室检测方法原理及操作核酸部分进行认识。实验室常用的畜禽检测方法有哪些?核酸检测的原理是什么?



〖 畜禽常见的检测方法概述 〗




〖 核酸检测的基本原理 〗


畜禽常见的检测方法有上述很多种,我们主要介绍核酸检测部分。

核酸检测是通过已知病毒的序列,进行方法的设计,然后对病毒的基因片段进行扩增,并且对片段进行解读,最终确认病原的一种方式。




〖 聚合酶链式反应(PCR) 〗


聚合酶链式反应,也就是PCR技术是最常用的基因片段扩增方法,是一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术,可以看作是生物体外的特殊DNA复制。


PCR技术的原理主要是利用DNA半保留复制的机理以及利用DNA在体外高温时变性会变成单链,低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合的性质。通过人为控制体外合成系统的温度,双链DNA变成单链,单链DNA与人工合成的引物退火,DNA聚合酶使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。


(PS:视频内有详细的PCR反应步骤动画,记得准时观看哦~)



〖 荧光定量PCR技术 〗


荧光定量PCR技术,是指在普通PCR技术的基础上,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。主要有两种方法:


1、染料法:SYBR Green  染料

在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。


(PS:视频内有详细的PCR反应步骤动画,记得准时观看哦~)


2、TaqMan探针法:


探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。


(PS:视频内有详细的PCR反应步骤动画,记得准时观看哦~)


更多关于实验室检测方法原理精彩内容请于周四上午10点准时收看哼哼百事通~~


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